接下來喆圖小編就來給大家講講用恒溫培養(yǎng)箱做植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的基本原理，并通過實(shí)驗(yàn)掌握植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法和技術(shù)，通過實(shí)驗(yàn)練習(xí)和鞏固無菌操作技術(shù)。

1、實(shí)驗(yàn)所需器材如下

 超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌器、恒溫培養(yǎng)箱、磁力攪拌器、恒溫培養(yǎng)搖床、鑷子、錐形瓶、水稻種子

2、實(shí)驗(yàn)操作步驟配制培養(yǎng)基

   按照培養(yǎng)基配方取各種藥品，MAX后用蒸餾水定容到所需體積。所配制的培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后用，固體瓊脂培養(yǎng)基分裝在250mL 的錐形瓶內(nèi)，每瓶約分裝30mL。

 3、水稻種子的消毒

一）將種子置于無菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，以體積分?jǐn)?shù)95％的酒精消毒1～2min。

二）取出后用無菌水沖洗2～3 遍。

三）將種子放入25.0g/L 的次氯酸鈉溶液中輕輕搖動后，浸泡60min 。

四）取出后用無菌水沖洗，將次氯酸鈉溶液充分洗凈。

4、接種

   在超凈工作臺內(nèi)，將滅菌后的水稻種子接到誘導(dǎo)愈傷組織的固體培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)瓶接5～10 粒種子。接種完畢后用封口膜將培養(yǎng)瓶封好，放在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行黑暗培養(yǎng)。

5、懸浮培養(yǎng)的開始：

   當(dāng)?shù)玫接鷤M織后，將其轉(zhuǎn)人到AA 液體培養(yǎng)基中。注意愈傷組織塊應(yīng)小于3mm . 若組織塊較大可用無菌解剖刀將其分割成小塊。液體培養(yǎng)基分裝在250mL 的錐形瓶內(nèi)．接種完畢后將瓶口用封口膜封好，把培養(yǎng)瓶放到恒溫培養(yǎng)搖床上進(jìn)行震蕩培養(yǎng)。調(diào)整搖床的旋轉(zhuǎn)速度，使之為120r/min。培養(yǎng)溫度為26℃，在黑暗中培養(yǎng)。

 6、懸浮培養(yǎng)物的保持

    進(jìn)行懸浮培養(yǎng)后要不斷進(jìn)行觀察，由于培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng)與培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)物的密度及細(xì)胞生長速度有關(guān)，因此當(dāng)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)物密度較大時，應(yīng)及時用無菌的吸管吸取部分培養(yǎng)物到一新的50mL 培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。同時還要及時淘汰一些大的組織團(tuán)塊和黃褐色的壞死組織。一般每隔4～7d 就要繼代一次。

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