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動物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)遵循實(shí)行“3R原則”,包括實(shí)驗(yàn)動物的替代、減少和優(yōu)化原則,其中減少即指盡量減少實(shí)驗(yàn)動物的數(shù)量。查閱文獻(xiàn),并未發(fā)現(xiàn)對實(shí)驗(yàn)動物數(shù)目有絕對要求,但在減少的同時,一定要滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。統(tǒng)計(jì)學(xué)上要求一般至少每組有6個可用數(shù)據(jù),才有意義。一般小鼠的每組一般不少于10只;一般大鼠每組不少于6只;大動物等級越高,價格越貴,根據(jù)情況可適當(dāng)減少,但一般不能少于4-5只。作為實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)者,我們不僅僅知其然,也要知其所以然1、為什么要進(jìn)行樣本量估算?科學(xué)性要求:使研究設(shè)計(jì)更加嚴(yán)謹(jǐn)。倫理學(xué)...
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細(xì)胞傳代培養(yǎng)的流程和注意事項(xiàng)如下:1、當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到其生長密度高處時(一般腫瘤細(xì)胞為80-100%,原代細(xì)胞和干細(xì)胞為80-90%,有些細(xì)胞為40-50%,熟知所養(yǎng)細(xì)胞的生長密度極限),移除舊培養(yǎng)液;2、用PBS洗滌兩次(舊培養(yǎng)中的鈣離子會抑制胰酶的活性),加入1ml胰酶消化液(以T25培養(yǎng)瓶為例),立即蓋好蓋子,把培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下觀察,如大部分細(xì)胞變圓,立即移除胰酶消化液(如大部分細(xì)胞漂起,可不移除胰酶消化液),加入5ml預(yù)熱培養(yǎng)基,用吸管取培養(yǎng)液吹打瓶壁細(xì)胞,使其脫...
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TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡原理和經(jīng)驗(yàn)細(xì)胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端,從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測,這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3'-OH形成,很少能夠被染色。由此,TUNEL成為了檢測DNA片段化(細(xì)胞凋亡)的方法。...
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使用馬弗爐融化金屬粉末是在實(shí)驗(yàn)室或工業(yè)生產(chǎn)中常見的一種操作,需要遵循安全規(guī)程和科學(xué)的操作步驟。以下是一個基本的操作流程:準(zhǔn)備工作:在開始之前,確保馬弗爐已經(jīng)清潔,并預(yù)熱至所需的溫度。準(zhǔn)備金屬粉末,確認(rèn)其化學(xué)成分和純度,確保它適合在馬弗爐中融化。準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)娜诨ぞ?,如耐火勺或crucible(坩堝)。裝載金屬粉末:將金屬粉末裝入耐火材料制成的坩堝中,注意不要裝得太滿,以免在融化過程中溢出。放入馬弗爐:輕輕地將裝有金屬粉末的坩堝放入馬弗爐內(nèi)。慢慢升降溫度的速度不可太快,以免金屬粉...
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1.IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色過深一抗?jié)舛冗^高或孵育時間過長——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時間孵育溫度過高——選擇4℃或室溫孵育2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在非特異性顯色石蠟切片脫蠟——延長脫蠟時間蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時間組織富含內(nèi)源性生物素與過氧化物酶——使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色弱或無染色一抗?jié)舛冗^低或孵育時間過短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L孵育時間組織中無目的抗原的表達(dá)一抗種屬來源與二抗不匹配注意事項(xiàng)切片脫蠟和水化要充分,加反應(yīng)液時要覆蓋組織充分;每次加液前甩干洗滌液,同時防止干片...
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細(xì)胞培養(yǎng)板是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的重要工具,選擇適合的細(xì)胞培養(yǎng)板對于細(xì)胞的生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有重要影響。本文將介紹一些選擇細(xì)胞培養(yǎng)板的關(guān)鍵因素,并提供一些應(yīng)用案例進(jìn)行說明。1.培養(yǎng)板材質(zhì):細(xì)胞培養(yǎng)板的材質(zhì)是一個重要的考慮因素。目前市場上主要有塑料和玻璃兩種材質(zhì)的培養(yǎng)板。塑料培養(yǎng)板價格較低且易于使用,而玻璃培養(yǎng)板具有更好的透明度和耐高溫的特性。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,可以選擇適合的材質(zhì)。2.表面涂層:細(xì)胞培養(yǎng)板的表面涂層可以影響細(xì)胞黏附和增殖。常用的涂層包括凝膠體、膠原蛋白、明膠等。例如,凝膠體涂...
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培養(yǎng)基的作用是為微生物提供生長和繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。培養(yǎng)基的質(zhì)量直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,因此對于微生物檢驗(yàn)而言,培養(yǎng)基的質(zhì)量控制尤為重要。培養(yǎng)基的主要作用有兩方面:①提供微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì);②培養(yǎng)基具有選擇性和差異性,可以選擇特定類型的細(xì)菌或真菌進(jìn)行培養(yǎng),并區(qū)分不同種類的微生物。因此,在微生物檢驗(yàn)中,必須對培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制,只有優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)基才能為微生物檢驗(yàn)提供精準(zhǔn)、可靠的檢測結(jié)果。培養(yǎng)基的概述培養(yǎng)基是用于保證微生物繁殖、鑒定、保持活力的物質(zhì)...
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海馬神經(jīng)元細(xì)胞分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)1、儀器CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱,解剖鏡,眼科鑷,眼科剪2、動物新生鼠(SD大鼠)3、耗材DMEM/F12培養(yǎng)基、聚賴氨酸實(shí)驗(yàn)步驟:包被:培養(yǎng)前一天將培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶或皿用0.01%多聚賴氨酸包被過夜。第二天早上來吸除包被液在無菌超凈臺中自然晾干后放置于CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中備用。配制神經(jīng)元專用培養(yǎng)基(DMEM/F12培養(yǎng)基中添加1%谷氨酰胺,2%B27,1%雙抗)取腦:選取新生24h之內(nèi)的SD大鼠數(shù)只,雌雄不限,75%酒精全身消毒,斷頭處死,無菌條件下分層剪開頭...
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